研究思路：线粒体与溶酶体直接接触调控线粒体自噬、代谢信号整合和细胞器互作网络。线粒体自噬过程中，受损线粒体被自噬体包裹后与溶酶体融合降解。该领域的前沿包括接触位点的分子组成和动态调控以及疾病中介导互作异常的分子机制。
实验步骤
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实验流程
1、共定位成像：用MitoTracker和LysoTracker双染，共聚焦显微镜分析共定位程度
2、构建分裂荧光素酶系统（线粒体-溶酶体接触报告系统）
3、自噬诱导/抑制条件下监测接触水平变化
4、免疫共沉淀检测接触位点复合物的组装（如溶酶体上的Ragulator与线粒体上的FLCN-FNIP2）
5、使用溶酶体酸化抑制剂（氯喹、巴弗洛霉素A1）阻断自噬流
6、电镜观察线粒体-溶酶体直接膜接触（FIB-SEM或电子断层扫描）
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所需试剂、耗材、仪器（扩充）
类别
名称
货号
用途
试剂
IP3R3抗体
abs151425 MAMs标志物
GRP78抗体
abs158118 MAMs标志物
VAPB抗体
abs116605 MAMs标志物
MFN2抗体
abs124573 MAMs标志物
TOM20抗体
abs146668 线粒体外膜标志物
Rhod-2 AM
abs47045183 线粒体钙离子探针
Fluo-4 AM
abs47014952 胞浆钙离子探针
Pex14
abs146270 过氧化物酶体Marker
CAT
abs111690 过氧化物酶体Marker
MitoTracker染料
abs47038879 线粒体燃料
LysoTracker染料
abs47038870 溶酶体染料
雷帕霉素
abs47000712 自噬诱导剂
EBSS培养基
abs90153 饥饿诱导自噬
Ragulator抗体
abs122810 溶酶体Marker
FLCN抗体
abs111703 线粒体Marker
FNIP2抗体
abs176134 线粒体Marker
Co-IP
abs955 蛋白互作
耗材
共聚焦培养皿
流式管
仪器
激光共聚焦显微镜
Zeiss LSM880