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细胞培养步骤
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- 2
- 3
分选细胞
分选CD34+细胞:从脐带血中使用CD34阳性选择磁珠(130-046-702)分离表达CD34的造血干细胞/祖细胞;
重悬至培养基
将分选出的CD34+细胞以造血干细胞分化培养基(DMEM/F12(SH30271.01)+ 20%热灭活人AB型血清+ 5 ng/mL亚硒酸钠、50 µM乙醇胺、20 mg/mL抗坏血酸+ 2 mM L-谷氨酰胺(abs9354-100mL)、1%双抗(SV30010)、25 µM β-巯基乙醇(abs9592-100mL))重悬,接种在经过照射处理的OP9-DLL4细胞上,并保持添加下列细胞因子,5 ng/mL IL-3(仅第一周添加),20 ng/mL SCF(UA040115-1mg),10 ng/mL IL-15(UA040010-1mg),10 ng/mL FLT3L(UA040011-1mg),20 ng/mL IL-7(UA040118-1mg);
传代
每周更换一次培养基以提供持续的营养和生长因子支持,28至35天左右可通过流式细胞术检测细胞表面标志物的变化,当细胞发展成为CD45+CD56+CD33−CD3−表型时,说明已经发育成为NK细胞