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细胞培养步骤
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造血祖细胞分化
1)使用OP9骨髓基质细胞作为支持细胞,与H1细胞(α-MEM+20%FBS)共同培养来诱导造血祖细胞分化;
2)共同培养大约12天后,在培养物中可以观察到许多分化的菌落,并且能够检测到小部分CD34+细胞的存在。
诱导NK细胞分化
1)收获经过“造血祖细胞分化”阶段后获得的细胞,并将其与表达Notch配体Delta-like-1(DLL1)的OP9细胞变体(OP9-DLL1细胞)共培养;
2)在含有20% FBS(abs972-500mL)、10 ng/mL SCF(abs05620-50ug)、5 ng/mL FLT3L(abs05148-50ug)、5 ng/mL IL-7(abs04991-100ug)、10 ng/mL IL-15(abs00818-50ug)的α-MEM(abs9506-500mL)培养基中,每周进行一次这样的共培养。
3)第一周期共培养结束后(第19天),大部分细胞仍然保持贴壁生长状态。
4)第二周期(第26天),开始出现一些明亮、圆形、半悬浮的细胞。
5)第三周期(第33天),这些细胞逐渐脱离并聚集在培养孔中心。
6)第四周期(第40天),更多的悬浮细胞显现出来,形态上表现为小型、圆形、明亮的淋巴细胞;可通过流式细胞术鉴定,细胞表型为CD45+CD56+CD3−TCRαβ−CD4−CD8−,即NK细胞。