2.4 NK细胞培养 hPSC干细胞分化来源的NK

1）使用OP9骨髓基质细胞作为支持细胞，与H1细胞（α-MEM+20%FBS）共同培养来诱导造血祖细胞分化；

2）共同培养大约12天后，在培养物中可以观察到许多分化的菌落，并且能够检测到小部分CD34+细胞的存在。

1）收获经过“造血祖细胞分化”阶段后获得的细胞，并将其与表达Notch配体Delta-like-1（DLL1）的OP9细胞变体（OP9-DLL1细胞）共培养；

2）在含有20% FBS（abs972-500mL）、10 ng/mL SCF（abs05620-50ug）、5 ng/mL FLT3L（abs05148-50ug）、5 ng/mL IL-7（abs04991-100ug）、10 ng/mL IL-15（abs00818-50ug）的α-MEM（abs9506-500mL）培养基中，每周进行一次这样的共培养。

3）第一周期共培养结束后（第19天），大部分细胞仍然保持贴壁生长状态。

4）第二周期（第26天），开始出现一些明亮、圆形、半悬浮的细胞。

5）第三周期（第33天），这些细胞逐渐脱离并聚集在培养孔中心。

6）第四周期（第40天），更多的悬浮细胞显现出来，形态上表现为小型、圆形、明亮的淋巴细胞；可通过流式细胞术鉴定，细胞表型为CD45+CD56+CD3−TCRαβ−CD4−CD8−，即NK细胞。