1.2 流式细胞术分析分选的naive CD4+T细胞

注意：用于标记细胞及流式后续分析的抗体推荐稀释,比例是1:10（细胞量10⁶/50μl）

注意：下面给了至多10⁶个有核细胞使用的体积。当细胞数量少于10⁶时，使用量不用改变；当细胞数量高于10⁶时，应相应的增加所有试剂的体积和总体积（如，2×10⁶个细胞，所用体积相应加倍）

1、细胞计数

2、细胞悬液300g离心10min，完全弃去上清

3、25μl缓冲液重悬最多10⁶个细胞

4、每种抗体均加5μl：

指标	荧光素	货号
CD45	BV510	abs1850510
CD4	BV421	740008
CD62L	PE	553151
CD3	APC-CY7	557596
CD44	FITC	561859

 

5、完全混匀，2-8℃避光孵育10min

注意：过高的温度和/或更长的孵育时间会引起非特异性染色，置于冰上需要更长的孵育时间

6、1-2ml缓冲液清洗细胞，300g离心10min，完全弃去上清

7、适量的缓冲液（如500μl）重悬细胞，之后流式细胞仪或荧光显微镜观察分析结果

注意：PI的用量为1μl/ml细胞悬液（如500μl悬液加0.5μl），PI碘化丙啶通过荧光排除死细胞