2.2 Mouse T细胞刺激实验思路&workflow

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​类别	​全称	​简称	​货号	​用途说明
​基础试剂	无菌1×PBS	-	-	抗体稀释与洗涤
​刺激抗体	CD3e（克隆145-2C11，NA/LE抗小鼠）	CD3e	Starter#S0B0509	T细胞初级刺激
​共刺激抗体	CD28（克隆37.51，NA/LE抗小鼠）	CD28	Starter#S0B1142	增强T细胞活化（可选）
​培养耗材	96孔或6孔平底板	平底板	-	细胞培养与刺激

 

（一）CD3单独刺激方案​

​1、抗体包被​

● 用无菌PBS配制10μg/mL CD3e抗体溶液

● 4℃包被培养板过夜（≥12小时）

 

2、洗涤​

● 无菌PBS洗涤3次（每次10mL）

● 关键：彻底去除未结合抗体

 

3、细胞接种与培养​

● 脾细胞悬液密度：2×10⁶/mL

● 培养条件：37℃, 1-4天

● 优化建议：设置24h/48h/72h/96h时间梯度

​​

（二）CD3/CD28共刺激方案​

​1、抗体包被​

● 96孔板：200μL/孔 CD3e (10μg/mL)

● 6孔板：2mL/孔 CD3e (10μg/mL)

 

​2、细胞接种规格​

​板型	​接种密度
96孔板	1-2×10⁵/孔
6孔板	4-6×10⁶/孔

 

3、共刺激添加

● CD28终浓度：2μg/mL

● 无需预包被：直接加入培养体系