实验步骤
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培养基配制
基础培养基：89% RPMI + 10% FBS + 1%抗生素/抗真菌剂（ABAM） + 50 μM 2-巯基乙醇。
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扩增条件
● 激活信号：使用板结合抗CD3（10 μg/ml） + 可溶性抗CD28（5 μg/ml）
● 培养板处理：提前4小时用抗CD3包被96孔板。
● 细胞密度：调整Treg细胞至 1×10⁶ cells/ml。
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培养过程
● 将Treg细胞加入包被抗CD3的孔中
● 加入含抗CD28的培养基（无Th17诱导因子IL-6/TGF-β）
● 37°C培养3-5天（文档第6.8节），期间Treg细胞扩增并维持抑制功能
● 扩增效果验证
→流式细胞术分析
表面标志：CD4+CD25+
功能性标志：Foxp3（需固定破膜染色）
→绝对细胞数：通过总细胞数×活细胞比例×CD4+CD25+比例计算
抑制功能验证：需通过共培养实验（如抑制效应T细胞增殖）