5.2 小鼠淋巴和血液中的T细胞分型检测样本处理

1、心脏采血​（需≤500μL）

● 用26G针头穿刺左心室

● 转移至含50μL EDTA（500mM）的EP管

● 轻柔颠倒混匀抗凝

 

2、脾脏处理​

● 含3mL T细胞培养基的15mL管保存

● 平皿内注射灌流：26G针头注入培养基冲洗

● 70μm筛网机械研磨

● ACK裂解红细胞（2mL/3min）

 

3、胸腺处理​

● 直接70μm筛网研磨

● 无红细胞裂解步骤

 

1、脾细胞刺激（胞内因子检测）​​

● 刺激剂：50ng/mL PMA + 500ng/mL离子霉素 + 10μg/mL BFA

● 阴性对照：单用BFA

● 48孔板培养：1.5×10⁶细胞/180μL

● 37℃, 5% CO₂刺激4h

 

2、流式抗体染色方案

● 预冷Fc阻断剂（抗CD16/32）预处理

● 胞内染色用FoxP3缓冲液套装

● 补偿微球（UltraComp eBeads）设对照

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