实验步骤
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所需产品清单
类别 产品名称/克隆号 应用场景 抗体 Anti-mouse CD3e PE-Cy5 (145-2C11) T细胞标记 Anti-mouse CD4 APC-eFluor 780 (RM4-5) CD4⁺ T细胞 Anti-mouse CD8a PE-Cy7 (53-6.7) CD8⁺ T细胞检测 Anti-mouse FoxP3 APC (FJK-16s) Treg胞内染色 细胞因子检测抗体 Anti-mouse IFN-γ PE-Cy7 (XMG1.2) IFN-γ检测 Anti-mouse TNF Alexa Fluor 700 TNF-α检测 阻断剂 Anti-mouse CD16/32 (Mouse BD FC Block) Fc受体阻断 名称 货号 用途 Fixation/Permeabilization Solution Kit 554714 细胞固定/透化 FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set 562574 FoxP3胞内染色 UltraComp eBeads Compensation Beads 01-2222-42 流式补偿对照 Fixable Viability Dye eFluor 510 564406 活死细胞区分 名称 供应商 货号 Brefeldin A (BFA)+Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)+Ionomycin calcium salt BD 550583 ACK lysis buffer Absin Abs9101 -
T细胞培养基 (500 mL)配方
● 热灭活胎牛血清：50 mL (10%)
● L-谷氨酰胺 (200 mM)：5 mL (2 mM)
● 青霉素-链霉素：5 mL (1%)
● β-巯基乙醇 (50 mM)：1 mL (0.1 mM)
● 丙酮酸钠 (100 mM)：1 mL (0.2 mM)
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FACS缓冲液 (1 L)配方
● 1× D-PBS：900 mL
● BSA：1 g (0.1%)
● EDTA (500 mM)：4 mL (2 mM)
● 叠氮化钠 (20%)：1 mL (0.02%)
● 保存：4℃保存≤6个月
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专用工作液
溶液名称 配方 保存条件 Fc阻断缓冲液 抗CD16/32抗体 1μL + 1× D-PBS 99μL 现配现用，4℃≤24h PMA储备液 (1 mg/mL) 5 mg PMA + 5 mL DMSO -20℃分装≤1年 离子霉素工作液 (747 μg/mL) 1 mg离子霉素 + 1.338 mL 1× D-PBS 4℃保存≤1年 BFA储备液 (20 μg/μL) BFA+ 250 μL DMSO（按说明书复溶） -20℃分装≤1年