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2.2.2 细胞样本

| 2.2.3 全血样本

该流程按照QIAGENQIAamp DNA Mini Kit(货号:51304)来进行,如果使用其他品牌试剂盒,请参考标准说明书进行操作,本试剂盒适用于103-5*106个细胞的扩增。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 1

    加入蛋白酶K

    20μlQIAGEN蛋白酶(或蛋白酶K)移液管放入1.5ml微量离心管底部;微量离心管加样200μl

  • 2

    加入Buffer AL

    加入200µl Buffer AL(用前摇匀,此步还未加入乙醇)。涡旋混匀,56°C下孵育10min;

  • 3

    加入乙醇

    加入200µl乙醇(96–100%)涡旋混匀;

  • 4

    离心,丢弃收集管

    将柱子放在一个2ml的收集管内,将第3步获得的混合液加到柱子上去。6000xg(8000rpm)下离心1min,丢弃收集管;

  • 5

    离心,丢弃收集管

    将柱子放在一个新的2ml的收集管内,加入500µl Buffer AW1,在6000xg(8000rpm)下离心1min,丢弃收集管;

  • 6

    离心,丢弃收集管

    将柱子放在一个新的2ml的收集管内,加入500µl Buffer AW2,在20,000xg(14,000rpm)下离心3min,将柱膜干燥,丢弃收集管;

  • 7

    洗脱DNA

    将柱子放在1个新的1.5ml或者2ml离心管中,吸取200µl Buffer AE,直接加在膜中央,室温孵育1min后,6000xg(8000rpm)离心1min洗脱DNA;

  • 8

    得到纯化后的DNA

    为达到更高产量,可重复步骤7。得到纯化后的DNA。

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