2.3.2 细胞样本

收集＜10⁷悬浮细胞到一个1.5ml离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接裂解，细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集；

12,000rpm离心10sec(或者300×g离心5min)，使细胞沉淀下来；

轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬，加入350μl(<5×10⁶细胞)或者600μl(5×10⁶-1×10⁷细胞)裂解液RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡20sec，充分裂解；

用带钝针头的一次性1ml(配9mm针头)注射器抽打裂解物5-10次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30sec)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量；

较精确估计裂解物(上清)体积，加入等体积的70%乙醇立即吹打混匀，不要离心；

立刻将混合物(每次小于700μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中(吸附柱放入收集管中)，12,000rpm离心60sec，弃掉废液；

加350μl去蛋白液RW1，室温放置30sec，12,000rpm离心30sec，弃掉废液。将吸附柱RA放回收集管中；

向吸附柱RA中央加入80μl DNase I工作液，室温放置15min；

加350μl去蛋白液RW1，室温放置30sec，12,000rpm离心30sec，弃掉废液。将吸附柱RA放回收集管中；

加入500μl漂洗液RW，12,000rpm 离心30sec，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW，重复一遍；

将吸附柱RA放回空收集管中，12,000rpm离心2min，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；

取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free H₂O(事先在 65℃水浴中加热效果更好)，室温放置1min，12,000rpm离心1min。