3.3 上样和凝胶电泳

如下操作步骤由产品abs9326上样缓冲液为例

 

1、按照每4μL样品加入1μL上样缓冲液(5X)的比例，混合样品和上样缓冲液(5X)；

 

2、直接上样到凝胶加样孔内，通常电泳至蓝色染料到达凝胶的底部附近即可停止。

如下操作步骤由产品abs9317核酸非变性预制胶5%为例，分离分子量范围为200bp-2kb：

 

1、准备样品：将样品和TBE loading buffer(5X)按照4：1混合均匀；

 

2、准备1X running buffer：取200mL的5X TBE buffer，加入去离子水至1L，制备成1X TBE buffer；

 

3、将预制胶装入兼容的电泳槽中，加入电泳缓冲液，再缓慢地将梳子拔出；

 

4、上样前请使用移液器吸取电泳缓冲液轻轻吹打加样孔，去除加样孔内残余的胶液；

 

5、上样：在梳孔内加入适当浓度和体积的DNA样品；

 

6、电泳条件：150V, 50~75min(电泳时间取决于凝胶浓度)；

 

7、电泳结束，取出凝胶。取出胶板，冲洗干净，按照拆胶说明(见下方步骤3：拆胶)，取出凝胶；

 

8、将取出的凝胶置于0.5μg/mL的EB染色液中，摇床染色20-30分钟(注意，EB染色液需避光)；

 

9、小心取出染色后的凝胶，置于干净的容器中，漂洗2-3次，洗去残留的EB染色液(EB染色液具有一定的毒性，请做好防护，若采用其他类型染色液，请参照该染色液说明书操作)；

 

10、将凝胶置于紫外线下进行观察或拍照，注意紫外线对人体有伤害，请做好防护措施。

1、先沿侧边胶处简单划一刀(或先将玻璃板侧边多余封胶材料去除)；

 

2、用刀在侧边胶处，沿着玻璃板和玻璃条的缝隙切开封胶材料(箭头处)，轻轻打开玻璃板；

 

3、取胶时，需在凝胶和两侧玻璃条之间沿着玻璃条划一刀，防止取胶时发生粘连使凝胶破碎。

PCR反应上样凝胶图：

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