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7.1 质粒提取

| 8.1 测序

针对质粒提取我们提供上样量1.5ml-5L的质粒提取试剂盒,有硅胶膜纯手工离心方式的,也有阴离子交换树脂纯重力流方式,对于高通量和加快实验进程我们也可以提供96孔板和真空底座形式的产品;新人友好型的质粒提取试剂盒含有LyseBlue颜色指示剂,肉眼可见裂解和中和情况,无需经验即可获得高的质粒产量,让实验轻松无忧。

如下操作步骤由产品abs60296质粒提取试剂盒为例(请自备1.5mL离心管、异丙醇、无水乙醇)

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 10
  • 11
  • 12
  • 13
  • 1

    溶液混匀

    取出洗涤液A和洗涤液B,按70%比例加入无水乙醇,如每3mL洗涤液A和洗涤液B各加入7mL无水乙醇,混匀;

  • 2

    离心弃上清

    1.5mL菌液,置于1.5mL离心管中,4000rpm 4℃离心3min,彻底弃除上清;

  • 3

    加样,离心弃上清

    加入0.5mL溶液A,充分振荡2min,使菌体充分悬浮,确保无絮块存在。4000rpm、4℃离心3min,彻底弃除上清;

  • 4

    加溶液,振荡悬浮

    加入200uL溶液I和5uL溶液B,充分振荡2min,使菌体充分悬浮,确保无絮块存在;

  • 5

    至溶液清亮

    加入400uL溶液II,盖紧管盖,轻轻颠倒混匀6次,注意整个管子的内表面均需与溶液II接触,室温放置至溶液清亮。(若5min后溶液未变清亮,说明菌体过多,应减少菌量。注意混匀手法要温和,切勿剧烈混合。);

  • 6

    加溶液颠倒混匀

    加入300uL溶液III,盖紧管盖,立即轻轻颠倒混匀8次,4℃放置5min。(此步注意要尽快混匀,但手法要温和);

  • 7

    离心吸取上清

    12000rpm 4℃离心10min,小心吸出上清,轻移至新的1.5mL离心管。(应在离心机自动停转后取出离心管,以免沉淀悬浮);

  • 8

    转移溶液

    加入300uL异丙醇,充分混匀。将吸附柱放入收集管内,将上述溶液600ul转入吸附柱内,静置1min12,000 rpm离心1min,弃收集管内废液,再将剩余溶液全部转移至吸附柱内,同上操作;

  • 9

    离心弃废液

    将吸附柱放回收集管内,加500μL洗涤液A至吸附柱内,静置2min12,000 rpm离心1min,弃收集管内废液;

  • 10

    离心弃废液

    将吸附柱放回收集管内,加500μL洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm离心1min,弃收集管内废液;

  • 11

    离心弃废液

    将吸附柱放回收集管内,加500μL无水乙醇至吸附柱内,静置2min12,000 rpm离心1min,弃收集管内废液。同时,按每份样本40 μL取洗脱液,放置于1.5mL灭菌离心管中,65℃预热(如提取10份菌液,即取4000 μL洗脱液预热);

  • 12

    离心去残留洗涤液

    将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm离心2min,离去残留的洗涤液。开盖,室温放置3分钟;

  • 13

    收集DNA溶液

    取出吸附柱,放入新的1.5 mL离心管内,向吸附柱膜中间加入40 μL预热洗脱液,静置1min,12,000 rpm离心2min,收集DNA溶液。

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