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9.1 突变概念、原理、应用介绍

| 9.2 突变(随机和定点突变)

实验步骤

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    突变概念

    对于突变,原核细胞和真核细胞经常受到外在因素和内在因素发生DNA损伤,如果这种损伤不能被修复就会导致突变。而根据中心法则,DNA会转录成RNA并翻译成蛋白质。

    DNA的突变会导致蛋白质的变化。但是并不是所有的突变都对蛋白质的生物功能产生影响。一旦生物体中出现基因突变,我们需要了解该突变的功能特性,探究是否会对某一种特定蛋白质或某一非编码RNA的功能产生影响。

    因此我们可以对DNA进行人为的突变实验,去研究蛋白质的功能或者对蛋白质去进行改变及定向进化。突变实验是分子克隆实验中的重要组成部分,这类实验方法是目前分子生物学研究中不可或缺的一部分。

    我们可以根据突变是否随机,将其分钟两大类:点突变和随机突变。 在点突变中又可根据突变的数量分成单点突变(突变数量为1)和多点突变(突变数量大于1,一般商业试剂盒最多可做到数量5)。

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    突变实验原理

     

    △点击放大图片

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    突变应用

    1、研究蛋白质相互作用

    受体或配体结合结构域的界定

    蛋白质相互作用结构域的鉴定

     

    2、研究蛋白质结构、功能

    通过改变密码子偏性以提高表达水平

    改变蛋白质活性

    改变蛋白抗原性、稳定性和溶解性

    改变酶的特异性,或许以及动力学特性

    结构与功能

    增加标签

     

    3、DNA元件研究

    启动子或增强子的功能研究

    用于载体创建

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