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8.1 安捷伦生物分析仪

| 9.1 上机测序

如下操作步骤以产品货号5067-4626的步骤为例,产品列表详见右下方推荐产品


2100生物分析仪
● 芯片式毛细管电泳
● 微流控芯片技术
DNA、RNA 或蛋白质分析
● 适用于新一代测序 (NGS)、基因表达、生物制药和基因组编辑工作流程
RIN值——RNA质控金标准,数字化评价RNA完整性




Tapestation系统
DNA RNA 样品质量控制的自动化电泳解决方案
ScreenTape 胶条技术,减少样品前处理过程中的手动操作
● 胶条含16 条独立泳道,每个样本独立分析,减少污染和残留风险
● 大幅减少样品 (1-2 µL) 和试剂消耗量
● 显著缩短运行时间(每个样品 1-2 分钟
RNA完整值(RINe)与基因组DNA完整值(DIN


 


片段化分析仪
● 全自动  分离胶和样品自动上样,无需手动灌胶,避免交叉污染
● 高通量  可一次检测12或96个样品,最多为288个样品
● 高分辨  分辨率为2bp
● 高灵敏  检测最低浓度可达5pg/ul
● 运行快  15min内完成700bp片段分离
● 成本低  无需芯片,毛细管可反复利用
● 易操作  PROSize2.0软件直观显示分析结果
● 用途广  可分析片段范围为35-40000bp
● 更灵活  可提供12,4896三种型号的毛细管列阵  

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    芯片制备器的准备

    1. 芯片槽的设定:将芯片的槽固定在位置C(实验为DNA,若是RNA或者蛋白则有其他位置,本实验全部固定于C,请勿移动位置)


    △点击放大图片


    2. 注胶器档位设定:将位置固定于最下端的档位(实验为DNA,若是RNA或者蛋白则有其他位置,本实验全部固定于最下档,请勿移动位置)


    △点击放大图片


    3.  注射器的位置:固定在1ml处,勿动!!

    4.  芯片混匀仪的设定:调制最大转速,勿动!(其自动设定为1min,制备芯片完毕后,放于槽内,其会在1min时自动停止)

  • 2

    试剂制备

    1.  将试剂盒从冷藏室内取出,避光放于室温环境下,至少30min。(试剂必须放置在室温30min平衡,否则会影响后续的实验,对结果产生严重影响)


    2.  试剂混合:从试剂盒中取出High Sensitivity DNA dye concentrate(上盖是蓝色的),将其涡旋混匀10S,使其中的DMSO充分混匀。稍微离心使液体进入管底。

    3. 15 μl  High Sensitivity DNA dye concentrate(上盖是蓝色的)加入到High Sensitivity DNA gel Matrix  vial(上盖是红色的),稍微涡旋混匀。

    4.  3中混合好的液体加入到过滤柱中。

    5. 4中柱子放置于室温离心机中,2240g离心10min

    6.  将离心柱丢弃,保存离心后的试剂(务必要避光,记录首次混匀的时间,试剂在混合后务必不要超过六周,每次混匀的试剂可以用于5张芯片)。

    7.  将试剂保存于4℃冰箱内,避光保存,每次使用前需要将其放于室温30min平衡。务必保持避光。

  • 3

    芯片制备

    1.  将胶混合液及试剂盒内试剂室温平衡30min后进行操作。

    2.  取出新的芯片,将芯片固定于芯片槽内,在注胶位置上,加入9μl注:每次加样务必加在管底,不能加在管壁上,且每次加样时将移液器打到第一档即可,防止产生气泡)。


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    3.  设定计时器60s倒计时,将注胶器上的注射器位置放于1ml处,盖上注胶器(盖严时会听到“当“的一声),将注射器缓慢推下,固定在最低档后开始倒计时60s


    4.  倒计时完成后,从档位处小心取下注射器,默数5s后,缓慢的将注射器上提,至1ml处时停止。

    5.  打开芯片制备器,在加胶孔各加入9μl混合胶。


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    6.  加入Marker,在所有的12个孔(11个样本槽和1个ladder孔)中加入5ul Marker(绿色的盖)。


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    7.  加入ladder,在Ladder孔中加入1μl Ladder(黄色的盖子)。


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    8.  加入样本(样本的浓度范围为5-500pg/μl)在样本孔中加入1μl样本,如果样本不足11个,在没有样本的孔中加入1μl 超纯水代替。


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    9.  将制备好的芯片置于芯片混匀仪中,在最大转速下,按下Start1min后自动完成,在5min内将芯片进行测定。

  • 4

    芯片检测

    1.  打开2100检测仪,点击软件打开页面。


    2.  将芯片放于芯片槽内,固定好后,关上机盖。


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    3.  选择测定程序:选择接头(电脑与2100的嫁接默认为1,如果脱机运行选择demo),电脑与2100连接后会显示online, 选择测试类型(点击analysis,选择High Sensitivity DNA)。


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    4.  样本详细信息的输入,在芯片位置处进行双击后进行输入。


    5.  点击Start开始运行。大约10min后开始出现Ladder,如果15ladder正常,则运行基本正常。在45min后仪器运行结束,注意仪器运行过程中,请勿操作界面,更不要震动台面。


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    6.  机器的清洗:仪器运行结束后,将空白的清洗芯片每孔加入9μl超纯水,换下运行结束的芯片,盖上机盖,半小时后取出。


    7.  关闭机器,关闭页面,关闭电脑,运行结束。

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