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1.1.6 反转录+PCR扩增

| 1.1.7 目的基因的纯化(切胶回收)

视频素材来源于YouTube  https://www.youtube.com/watch?v=qmACKSvFZpM
版权归原作者所有

得到RNA之后,以RNA为模板反转为cDNA。然后再以反转录得到的CDNA为模板,加入之前设计好的引物,进行PCR扩增。
反转录和PCR扩增可以选择两步法进行操作,也可以选择一步法进行操作。
通常使用试剂盒和PCR仪器进行操作,这里参照了爱必信的RT-PCR Kit产品说明书进行一步法操作介绍。
产品组分:

△点击放大图片

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    试剂准备

    RNA 模板、引物、2×One-Step RT-PCR SuperMixRT Enzyme Mix RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。

  • 2

    配置反应体系

    △点击放大图片

    轻轻混匀后短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。

  • 3

    放入PCR仪中,设置反应程序

    常用反应程序:


    △点击放大图片

  • 4

    检测纯度和浓度

    反应完成后,测定纯度和浓度。吸光度A260/280比值接近1.8表明纯度较高。

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