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目的基因扩增之后，就要将目的基因和表达载体连接在一起。通常使用酶切连接的方法，将目的基因和表达载体分别用同样的两个限制性内切酶进行双酶切，得到互补的酶切位点，然后用T4连接酶将这两部分连接在一起。
酶切操作建议参考购买的限制性内切酶的使用说明书，这里介绍常规方法。