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根据构建质粒时使用的标签选择对应的标签亲和层析产品。如果有纯化仪器可以选择使用预装柱进行纯化。这里以His标签预装柱为例进行介绍。
GST标签纯化步骤可参考：https://www.univ-bio.com/article.html?id=3886
实验步骤
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配置缓冲液
按照以下配方进行缓冲液配置，
结合缓冲液： 20mM 磷酸钠缓冲液， 0.5M 氯化钠， 20-40mM 咪唑， PH7.4
洗脱缓冲液： 20mM 磷酸钠缓冲液， 0.5M 氯化钠， 500mM 咪唑， PH7.4
缓冲液配置完成后需要预先过滤和超声去除气泡。 -
样品处理
大肠杆菌菌体通过离心收集（16,000g for 3 min），菌体沉淀用裂解液进行悬浮（100 μl of 50 mM Tris–HCl buffer, pH 8.0, containing 200 mM NaCl, 2% Triton X-100 and 3 mM protease inhibitor PMSF），然后冰上超声20次（sonicated 3 s with 7 s intervals between each pulse）。
离心取上清，用0.45um滤膜进行过滤。 -
连接层析柱
系统设置一个低流速， 移除预装柱顶部的堵头，把柱子连接到 ӒKTA 纯化仪的接头上，
注意要液滴对液滴进行连接，防止引入气泡。
去除柱子底部的堵头，连接到纯化仪上。 -
预装柱平衡
用 3-5 个柱体积的蒸馏水洗去乙醇。
用 5 个柱体积的结合缓冲液平衡柱子，建议流速是 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。 -
样品上样
用上样环或者 superloop 加入预处理的样品（样品在上柱前一定要进行离心和过滤），
在上样时建议流速为 0.2-1ml/min（1ml 体积柱子）和 0.5-5ml/min（5ml 体积柱子）。
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结合缓冲液洗去杂蛋白
用结合缓冲液洗涤至少 10 到 15 个柱体积，直到吸收峰达到稳定基线或在流出物中没有物质流出。洗涤过程中建议保持流速为 1-2ml/min（1ml 体积柱子）和 5-10ml/min（5ml体积柱子）。
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目标蛋白洗脱
用洗脱缓冲液采用一步洗脱或者线性梯度洗脱（拉咪唑浓度梯度）。一步洗脱通常 5 个柱体积，线性洗脱通常 10-20 个柱体积。在洗脱过程中保持流速为 1-2ml/min（1ml 体积柱子）和 5-10ml/min（5ml 体积柱子）。
洗脱后，用 3-5 个柱体积的结合缓冲液洗涤柱子，然后加入 20%乙醇。拧上柱子上下的堵头，防止柱子变干。
Note：如果需要去除纯化后样品中的咪唑，建议使用 HiTrap Desalting 脱盐柱或者 PD-10 Dealting 脱盐柱。 -
跑胶鉴定
跑胶鉴定