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根据构建质粒时使用的标签选择对应的标签亲和层析产品。如果不使用纯化仪器，可以选择重力纯化方法。这里以His标签填料为例进行介绍。
实验步骤
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配置缓冲液
按照以下配方进行缓冲液配置，
结合缓冲液： 20mM 磷酸钠缓冲液， 0.5M 氯化钠， 20-40mM 咪唑， PH7.4
洗脱缓冲液： 20mM 磷酸钠缓冲液， 0.5M 氯化钠， 500mM 咪唑， PH7.4
缓冲液配置完成后需要预先过滤和超声去除气泡。 -
样品处理
大肠杆菌菌体通过离心收集（16,000g for 3 min），菌体沉淀用裂解液进行悬浮（100 μl of 50 mM Tris–HCl buffer, pH 8.0, containing 200 mM NaCl, 2% Triton X-100 and 3 mM protease inhibitor PMSF），然后冰上超声20次（sonicated 3 s with 7 s intervals between each pulse）。
离心取上清，用0.45um滤膜进行过滤。 -
准备 PD-10 空柱
用20%的乙醇洗涤滤膜。
用蒸馏水润洗滤膜。
将滤膜放入PD-10空柱。 -
填料准备
轻柔震荡瓶子，直到填料悬浊液均一。
将需要量的填料悬浊液从瓶中转移到离心管中。
用 500xg 离心 5min 以沉淀填料。
除去上清，加入适量蒸馏水。
轻柔的振荡填料悬浊液 3min， 用 500xg 离心 5min。
除去上清，加入适量结合缓冲液，重复步骤 5.
把填料悬浊液转移到量筒中。
加入适量体积的结合缓冲液，使悬浊液中的填料浓度达到 50%。 -
混合填料和样品
将样品加入含有 50%填料的悬浊液中（样品在上柱前要进行离心和过滤）。 Ni Sepharose 6FF 的平均载量是40mg/ml。则 1ml 的 50%悬浊液的载量为大约 20mg 蛋白。
将样品和填料混合物在摇床上低速混合 1h。 -
装柱
将样品和填料混合物加入到 PD-10 的空柱中。
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结合缓冲液洗去杂蛋白
用结合缓冲液洗涤 3-5 个柱体积。
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目标蛋白洗脱
用 3-5个柱体积的洗脱缓冲液洗脱，收集流出物。
洗脱后，用 3-5 个柱体积的结合缓冲液洗涤柱子，然后加入 20%乙醇。拧上柱子上下的堵头，防止柱子变干。
Note：如果需要去除纯化后样品中的咪唑，建议使用 HiTrap Desalting 脱盐柱或者 PD-10 Dealting 脱盐柱。 -
跑胶鉴定
跑胶鉴定