结合缓冲液的PH比目标蛋白的等电点高一个PH。
根据PH参照下表配置结合缓冲液：

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洗脱缓冲液：结合缓冲液+1M NaCl

样品上样前需要过滤，置换到结合缓冲液中。缓冲液需要预先过滤和超声去除气泡。

系统设置一个低流速， 移除预装柱顶部的堵头，把柱子连接到纯化仪的接头上，注意要液滴对液滴进行连接，防止引入气泡。

去除柱子底部的堵头，连接到纯化仪上。

用 3-5 个柱体积的蒸馏水洗去乙醇。
用 5 个柱体积的结合缓冲液平衡柱子，建议流速是 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。

用上样环或者 superloop 加入预处理的样品（样品在上柱前一定要进行离心和过滤），
在上样时建议流速为 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。

用结合缓冲液洗涤至少 5个柱体积，直到吸收峰达到稳定基线或在流出物中没有物质流出。洗涤过程中建议保持流速为 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml体积柱子）。

用洗脱缓冲液采用一步洗脱或者线性梯度洗脱（拉NaCl梯度）。一步洗脱通常 5-10 个柱体积，线性洗脱通常 10-20 个柱体积。在洗脱过程中保持流速为 1ml/min（1ml 体积柱子）和 5ml/min（5ml 体积柱子）。
洗脱后，使用5个柱体积结合缓冲液+1M NaCl进行再生，然后用 5-10 个柱体积的结合缓冲液洗涤柱子，然后加入 20%乙醇。拧上柱子上下的堵头，防止柱子变干。

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