UFBP019-Mouse TILs Panel(11色)
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
-
逻辑设门方案
△点击放大图片
-
生物学背景
免疫细胞来源于造血干细胞，随着分化发育，分为髓系和淋系大类细胞群。本方案提供多色流式骨架案例，可用于比较淋系和髓系大类细胞群，初步筛选髓系细胞如中性粒细胞、单核细胞、树突状细胞，及淋系细胞T细胞，在各种临床疾病，如自体免疫性疾病、免疫缺陷、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、再生障碍性贫血、病毒感染疾病、恶性肿瘤、免疫治疗等中均会发生异常改变。这些指标的检测对监测机体的免疫功能，控制上述疾病的发生于发展，了解疾病的机制，指导临床治疗具有极其重要的意义。免疫缺陷时CD4+,CD8+T减少；部分病毒时，CD8+T增多。
-
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 UV laser 355nm CD45 BUV395 30-F11 5 μL 564279 CD3 BUV737 145-2C11 5 μL 612771 Violet 405nm F4/80 BV421 45-2342 5 μL 565411 L/D BV510 / 2 μL 564406 CD11b BV605 M1/70 5 μL 563015 CD11C BV711 HL3 5 μL 563048 Blue 488nm MHCII BB515 2G9 5 μL 565254 Green 561nm FOXP3 PE MF23 5 μL 560408 CD4 PerCP RM4-5 5 μL 553052 Red 640nm CD8 AF700 53-6.7 5 μL 557959 CD25 APC 3C7 5 μL 558643 -
逻辑设门图&数据结果说明
△点击放大图片
△点击放大图片
使用T细胞亚群多色方案对Mouse Blood 淋系细胞进行特性研究
来自Mouse Blood进行代表性分析。首先根据光散射特性去黏连得到单细胞，再利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞。通过FVS死活染料圈出活细胞，识别了CD45+细胞。再圈出CD3+T细胞，通过CD4+/CD8+确定CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞；再进行CD3-非T细胞圈门，通过CD11b+/SSC-A识别髓系细胞，CD11c+/MHCII+识别DC细胞,F4/80+/SSC-A识别Macrophages。在5激光18色BD Fortessa流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。脑图和热图等使用Flowjo v10软件上的T-SNE，FlowSOM以及ClusterExplorer插件创建：
通过对contact进行T-sne降维分析，生成如上流式结果图，代入常规数据圈门，可以显示样本内T细胞，Treg细胞，DC细胞,巨噬细胞等之间的比例关系和内在联系，大幅度集成数据的可视化和信息量。
△点击放大图片
通过对contact进行T-sne降维分析，生成如上流式结果图，利用热力图展示不同的biomarker的表达情况以及其具体的内在联系，在可视化和信息集成化上更有优势，关键细胞靶点的表达情况也一目了然。
△点击放大图片