UFBP032-Mouse T B NK Panel(10色)
实验步骤
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生物学背景
T淋巴细胞，是由来源于骨髓的淋巴干细胞，在胸腺中分化、发育成熟后，通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能，按细胞表面分化抗原(CD)的不同,可分为CD4+T和CD8+T两大亚群，其中CD8+T细胞，是适应性免疫系统的关键组成部分，在免疫系统抵御病原体（如病毒、细菌和肿瘤）中发挥重要作用[1]。 辅助性CD4+T细胞（如Th1、Th2、Th9、Th17、Th22、Tfh和Treg）是在胸腺中生成并表达αβ-T细胞受体或TCR，但与CD4+T细胞不同的是它们的表面表达CD8 ，并且对MHC I类的外源性抗原反应。
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实验信息
样本类型 Human PBMC 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Human surface maker staining 使用的仪器 Beckman CytoFLEX(5L18S) -
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆号 体积/测试 货号 Ultraviolet 355nm CD4 BUV496 RPA-T4 2 μL 741134 Violet 405nm CD3 BV786 SK7 2 μL 563800 CD45RA BV605 HI100 2 μL 562886 CD25 BV421 M-A251 2 μL 562442 CD127 BV650 HIL-7R-M21 2 μL 563225 L/D FVS510 / 2 μL 564406 Blue 488nm HLA-DR FITC TU36 2 μL 555560 PD-1 RB705 EH12.1 2 μL 570245 VG 561nm CD62L PE DREG-56 2 μL 560966 CD69 PE-CY7 FN50 2 μL 560712 Red 640nm CCR7 APC-R700 3D12 2 μL 565867 CD8 APC-CY7 RPA-T8 2 μL 557760 -
逻辑设门图＆数据结果说明
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使用FlowJO V10.9.1对多色方案进行分析：
Human PBMC样本分析逻辑如上：首先 FSC-A FSC-H 去除黏连细胞获取单细胞，FSC-A SSC-A获取总目的细胞，CD3+L/D- 获取活的CD3+细胞，分别识别了 CD3+ CD4+获取TH 细胞CD25+CD127+ 或得Treg 细胞 ，CD3+CD8+获取TC 细胞，通过CD45RA CCR7 分别观测 TCM TEM TNaive 的状态 ，同时通过TSNI，Flowsom、ViolinBox 插件进行多元化大数据分析，图中不同颜色代表不同亚群情况，数据采集来自Beckman CytoFLEX(5L18S)流式细胞仪。