UFBP034-Mouse DC(11色)
实验步骤
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生物学背景
树突状细胞（Dendritic Cells，DCs）是最早被认识的免疫细胞之一，是先天免疫和适应性免疫之间的主要桥梁，主要存在于组织中，如皮肤、黏膜和淋巴器官，以及循环系统中的血液和淋巴液中。DCs的主要功能是捕获、加工和递呈抗原。它们通过细胞表面上的特定受体（如Toll样受体）识别和捕获病原体、细胞残骸和其他抗原，然后将其吞入细胞内部进行加工和消化，并将抗原递呈给适应性免疫系统中的T细胞和B细胞，诱导适应性免疫反应的开始。因此，树突状细胞在引发和调节免疫反应中起着至关重要的作用。另外，它们还可以通过释放细胞因子和趋化因子来激活和诱导其他免疫细胞，如T细胞、B细胞和NK细胞产生特定的免疫应答。
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实验信息
样本类型 Mouse kidney 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Blood isolation surface and intracellular marker staining 使用的仪器 5-laser,18-color(5 UVlaser/5 violet/2 blue/3green/3 red) BD Fortessa Flow Cytometer -
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆号 体积/测试 货号 Violet 405nm GR-1 BV650 RB6-8C5 5ul 740454 CD45 BV510 30-F11 5ul 563891 CD86 BV786 24F 5ul 743216 CD80 BV605 16-10A1 5ul 563052 Blue 488nm CD11C FITC HL3 5ul 557400 CD103 PE Ber-ACT8 5ul 550260 YG 561nm CD40 PE-CF594 45739 5ul 562847 L/D PerCP / 5ul 559925 MHCII APC M5/14.15.2 5ul 562367 Red 640nm CD11b APC-CyTM7 M1/70 - 557657 F4/80 APC-R700 T45-2342 5ul 565787 -
逻辑设门图＆数据结果说明
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用C57小鼠肾脏单细胞为样本，对髓系免疫细胞进行多色免疫学特性研究首先根据FSC-A和SSC-A圈中目的细胞，再利用光散射特性去黏连得到单细胞。通过死活染料圈出活细胞，识别了CD45+白细胞。再通过CD11b+Gr-1确定粒细胞，CD11bhigh+F4/80low+确认血液招募来的浸润性巨噬细胞，CD11b+F4/80high+确认组织驻留性巨噬细胞。再通过MHCII+CD11c+确定树突状细胞，随后通过CD103+和CD11b+把DC分为cDC1与cDC2。最后通过CD80、CD86、CD40检测DC的活化和抗原呈递功能。在5激光18色BD Fortessa流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。
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通过对contact进行T-sne降维分析，生成如上流式结果图，代入常规数据圈门，可以显示样本内各种细胞等之间的比例关系和内在联系，大幅度集成数据的可视化和信息量。同时通过对contact进行T-sne降维分析，生成如上流式结果图，利用热力图展示不同的biomarker的表达情况以及其具体的内在联系，在可视化和信息集成化上更有优势，关键细胞靶点的表达情况也一目了然。