UFBP034-Mouse DC(11色)
实验步骤
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生物学背景
T细胞可塑性对于在不同微环境中的免疫应答的适应很重要，并且可以特异性地帮助宿主对不同组织定植的病原体进行防御。Naive T分为CD4+ αβ T细胞和CD8+ αβ T细胞，主要是在淋巴结之间巡逻、监视，一旦被抗原递呈细胞活化，前者可快速分化为效应或调节T，后者可分化为细胞毒T和记忆T。而Memory T分为中央记忆T和效应记忆T两个子类，前者主要位于次级淋巴器官，可针对再次出现的抗原快速增殖并分化为效应T，后者主要位于外周组织，一旦再次受到抗原刺激，可快速产生效应细胞因子,两者略有不同。PD-1是一种重要的免疫抑制分子，通过向下调节免疫系统对人体细胞的反应，以及通过抑制T细胞炎症活动来调节免疫系统并促进自身耐受，而PD-L1与PD-1的结合是则是免疫逃逸的关键机制之一。
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实验信息
样本类型 Human blood 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Blood isolation surface and intracellular marker staining 使用的仪器 5-laser,18-color(5 UVlaser/5 violet/2 blue/3green/3 red) BD Fortessa Flow Cytometer -
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆号 体积/测试 货号 UV laser 355nm CD45 BUV395 HI30 5 μL 563791 / BUV496 / 5 μL / Violet 405nm CD8 BV421 G42-8 5 μL 743064 L/D BV510 / 2 μL 564406 / BV711 / 5 μL / CCR7 BV786 2-L1-A 5 μL 566758 CD279 BV605 MIH4 5 μL 745139 Blue 488nm CD4 FITC L200 5 μL 550628 CD45RO BB700 UCHL1 5 μL 745807 VG 561nm CD127 PE HIL-7R-M21 5 μL 557938 CD274 PE-CY7 MIH1 5 μL 558017 Red 640nm CD3 APC-CY7 SK7 5 μL 557832 CD25 APC M-A251 5 μL 561399 -
逻辑设门图＆数据结果说明
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使用T细胞亚群多色方案对人T细胞进行特性研究
来自健康人的外周血进行代表性分析。首先根据光散射特性去黏连得到单细胞，再利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞。通过CD45+SSC-A白细胞门，识别了CD3+T细胞。通过CD4+/CD8+确定CD4+辅助T细胞和细胞毒性CD8+T细胞，在CD4+辅助T细胞中通过CD25+CD127+识别TREG，CD8+T细胞中查看免疫检查点PD-1,PD-L1。最后，通过CD45RA/CCR7确定出Naive/Effector Memory/Central Memory/Effector四类T细胞亚群。在5激光18色BD Fortessa流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。脑图和热图等使用Flowjo v10软件上的downsample、FlowSOM以及flowAI插件创建。