UFBP021-Mixed Lymphocyte Reaction混合淋巴细胞反应
实验步骤
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生物学背景
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混合淋巴细胞反应（Mixed Lymphocyte Reaction, MLR）是指在某供体抗原提呈细胞（APCs）的刺激下，另一个供体的T细胞将发生增殖。两个个体间HLA抗原差异程度越大，反应越强烈。其中的淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化。MLR主要用来评价免疫靶点的药物受试物对人的原代T细胞功能的影响，分析和鉴定受试物在由原代APC介导的T细胞活化中的作用程度。
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实验信息
样本类型 Human blood 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Blood isolation surface and intracellular marker staining 使用的仪器 5-laser, 18-color (2 UV laser/6 violet/2 blue/5 green/3 red) BD Fortessa Flow Cytometer -
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆号 体积/测试 货号 Violet 405nm HLA-DR BV421 G46-6 5μl 562804 L/D BV510 / 2μl 564406 IL-2 BV605 MQ1-17H12 5μl 564165 CD11C BV711 B-ly6 5μl 563130 Blue 488nm CD86 BB515 2331 (FUN-1) 5μl 564544 CD80 PE-Cy7 L307.4 5μl 561135 Green 561nm IFN-γ PE B27 5μl 562016 CD107a BB700 H4A3 5μl 566558 Red 640nm CD3 APC-Cy7 SP34-2 5μl 557757 CD4 AF647 RPA-T4 5μl 557707 CD69 APC-R700 FN50 5μl 565154 -
逻辑门方案
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逻辑设门图 & 数据结果说明
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使用MLR多色方案对上海某医院患者的血液中的T细胞和DC细胞进行特性研究。来自Human Blood进行代表性分析，首先利用FSC-A和SSC-A圈中目的细胞，再根据光散射特性去黏连得到单细胞，通过FVS死活染料区分活细胞和死细胞，识别了CD3+ T细胞，通过CD69检测T细胞活化状态，通过CD107a检测T细胞脱颗粒功能，再通过CD4+鉴定CD4+辅助T细胞，检测其中IL-2和IFN-γ的分泌；再进行CD3-非T细胞圈门，通过CD11C+/HLA-DR+识别DC细胞，通过CD80/CD86检测其活化状态。在5激光18色BD Fortessa流式细胞仪上采集样本，使用FlowJo v10软件进行数据分析。脑图和热图等可以使用FlowJo v10软件上的T-SNE、FlowSOM等插件创建。
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通过对Contact进行T-SNE降维分析，生成如上流式结果图，利用热力图展示不同的biomarker的表达情况以及其具体的内在联系，在可视化和信息集成化上更有优势，关键细胞靶点的表达情况也一目了然。