UFBP035-Human TBNK Panel(12色)
实验步骤
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生物学背景
T、B淋巴细胞亚群和NK细胞在各种临床疾病，如自体免疫性疾病、免疫缺陷、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、再生障碍性贫血、病毒感染疾病、恶性肿瘤、免疫治疗等中均会发生异常改变。这些指标的检测对监测机体的免疫功能、控制上述疾病的发生和发展、了解疾病的机制、指导临床治疗具有极其重要的意义。
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实验信息
样本类型 Human blood 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Blood isolation surface and intracellular marker staining 使用的仪器 5-laser,18-color(5 UVlaser/5 violet/2 blue/3green/3 red) BD Fortessa Flow Cytometer -
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆号 体积/测试 货号 UV laser 355nm CD45 BUV395 30-F11 5 μl 564279 CD4 BUV496 SK3 5 μl 612936 Violet 405nm CD11C BV421 B-ly6 5 μl 562561 L/D BV510 / 2 μl 564406 CD11B BV711 M1/70 5 μl 563168 CD14 BV605 M5E2 5 μl 564054 Blue 488nm CD20 FITC 2H7 5 μl 556632 CD10 Percp-cy5.5 H110a 5 μl 563508 Green 561nm CD56 PE B159 5 μl 555516 CD19 PE-CY7 SJ25C1 5 μl 557835 Red 640nm CD3 APC-CY7 SK7 5 μl 557832 CD38 APC HIT2 5 μl 555462 -
逻辑设门图&数据结果说明
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使用T细胞亚群多色方案对Human Blood 淋系和髓系细胞进行特性研究
来自Human Blood进行代表性分析。首先根据SSC-A和SSC-A圈中目的细胞，再利用光散射特性去黏连得到单细胞。通过FVS死活染料圈出活细胞，识别了CD45+白细胞。再通过CD3+确定T细胞，CD3+CD56+确认NK细胞，NKT细胞，随后通过CD4+确认辅助T细胞；再进行CD3-非T细胞圈门，通过CD19+/CD20+识别B细胞，CD11B+CD11C+确认DC。在5激光18色BD Fortessa流式细胞仪上采集样本。使用Flowjo v10软件进行数据分析。
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通过对contact进行T-sne降维分析，生成如上流式结果图，代入常规数据圈门，可以显示样本内T细胞，B细胞，NK细胞等之间的比例关系和内在联系，大幅度集成数据的可视化和信息量
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同时通过对contact进行T-sne降维分析，生成如上流式结果图，利用热力图展示不同的biomarker的表达情况以及其具体的内在联系，在可视化和信息集成化上更有优势，关键细胞靶点的表达情况也一目了然。
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利用ClusterExplorer插件将X-shift聚类分析的细胞进行指标热力图展示
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利用对Live细胞进行Flowsom聚类分析，自动生成多个细胞亚群，对进一步挖掘微小亚群，探索亚群之间的相关性进行提示和展现。