UFBP025-Differentiation and activation of human T cells Panel(14色)
实验步骤
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生物学背景
T淋巴细胞可在CD3表达的基础上被免疫表型化，随后进一步细分（如CD8+杀伤性T细胞和CD4+辅助性T细胞）。此外，T细胞表型是灵活的，可以随不同的微环境发生变化；表型也可能重叠在多个T细胞群体之间。杀伤性T细胞（又被称作细胞毒性T淋巴细胞，CD8+）能识别抗原，这些抗原是由感染因子释放的，并与宿主细胞结合。杀伤性T细胞能够识别多种细胞类型和病原体并与之相互作用。T细胞受体与外源抗原结合，触发细胞毒素向受感染细胞释放，导致细胞死亡。杀伤性T细胞的主要鉴定标志物就是CD8+，但是如果需要根据不同生理状态下对杀伤性T细胞进行功能鉴定，还可以进一步增加其他标志物形成标志物组合。比如，对杀伤性T细胞进一步定义幼稚、中央记忆性、效应记忆性和效应T细胞亚群的经典标志物是基于趋化因子受体7(CCR7；也称为CD197) 和CD45RA(或CD45RO)的表达情况；对杀伤性T细胞进一步分析其活化状态是基于HLA-DR和CD38的表达情况。
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实验信息
样本类型 Human blood 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Human Blood Surface marker staining 使用的仪器 5-laser,20-color BD FACS Fortessa Flow Cytometer -
配色方案
激光 标志物 荧光染料 克隆 体积/测试 货号 Blue 488 nm CD3 FITC HIT3a 5 μl 555339 CD16 PE B73.1 5 μl 561313 CD11c PerCP-Cy5.5 B-ly6 5 μl 301623 CD45RA PE-Cy7 HI100 5 μl 560675 Red 640 nm CD56 APC B159 5 μl 555518 CD45 APC-Cy7 2D1 5 μl 557833 CD69 APC-R700 FN50 5 μl 565154 Violet 405nm L/D BV510 / 5 μl 564406 CD8 BV650 RPA-T8 5 μl 563821 CD25 BV421 M-A251 5 μl 562442 CD86 BV605 2331 (FUN-1) 5 μl 562999 CCR7 BV786 3D12 5 μl 566158 CD11B BV711 D12 5 μl 563168 Ultraviolet 355nm CD4 BUV496 SK3 5 μl 564652 -
逻辑设门方案
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逻辑设门图&数据结果说明
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使用14色的多色方案对人的PBMC中T、NK、髓系细胞进行研究
首先根据光散射特性去黏连得到单个核细胞，再利用死活染料圈取所有活细胞。通过CD45圈取所有的白细胞群。再通过CD3+圈取所有的T细胞。再通过CD45RA和CCR7进一步定义幼稚、中央记忆性、效应记忆性和效应T细胞。再通过CD4与CD8圈取辅助T淋巴细胞和毒性T淋巴细胞。用CD69与CD25对T细胞进行区分早晚活化。用CD3-CD56+圈取NK细胞。再用CD11b+CD86+圈取DC细胞。降维图和聚类图等使用Flowjo v10软件上的T-SNE、FlowSOM插件创建。