UFBP055-Human T Cell+B Cell Panel(10色)
实验步骤
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逻辑设门方案
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生物学背景
基于流式细胞术通过对T细胞的表面标志物进行多重标记，使得研究者可以同时检测细胞活化、增殖和耗竭的特征。活化是指当未成熟的T细胞（naive T细胞）识别到其特异性抗原，并通过抗原呈递细胞（APC）上的主要组织相容性复合体（MHC）分子与T细胞受体（TCR）结合后，开始的一系列生理过程。耗竭是指在慢性感染或肿瘤微环境中，T细胞失去有效抗原识别和应答能力的现象。
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实验信息
样本类型 Human PBMC 方案类型 Multicolour panel 实验方案 Human surface marker staining and intracellular marker staining 使用的仪器 BD Celesta(3L12C) -
配色方案
激光 指标 荧光素 克隆 货号 抗体量 405nm CD279 BV650 EH12.1 564104 2 μL L/D BV510 / 564406 1 μL CD8 BV605 HIT8a 740411 2 μL CD25 BV421 2A3 564033 2 μL CD69 BV786 H1.2F3 564683 2 μL 488nm CD4 BB515(FITC) RPA-T4 564419 2 μL CD45 Percp cy5.5 H130 564105 2 μL IFN-r PE-CY7 B27 557643 2 μL 640nm CD19 PE CB19 abs180043 2 μL CD3 APC-CY7 Sk7 557832 2 μL -
逻辑设门图&数据结果说明
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使用FlowJo V10.10.1对多色方案进行分析
逻辑关系如下：首先FSC-A FSC-H去除黏连细胞获取单细胞，FSC-A SSC-A获取总目的细胞，CD45+L/D-获取活的CD45+细胞，分别识别了CD3+ CD4+CD8+T细胞及B cell (CD19+)。再通过CD279、CD25、CD69、IFN-r等指标确定TH、CTL细胞的细胞分化、活化、耗竭等情况。通过I-SNE插件进行大数据分析，图中热图代表不同指标的表达差异，数据采集来自BD Celesta(3L13S)流式细胞仪。