昆虫细胞蛋白提取操作步骤
该流程是按照Thermo的89802的I-PER®昆虫细胞蛋白提取试剂来进行，I-PER®昆虫细胞蛋白提取试剂盒可从悬浮和贴壁培养的Sf9和Sf21昆虫细胞中提取细胞质蛋白。如果使用的是其他品牌的试剂盒，可以参考其说明书进行操作。为了避免昆虫细胞部分溶解，对蛋白产量产生不利影响，整个操作过程须严格按照说明书进行。
实验步骤
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细胞计数
使用血细胞计数器确定每毫升培养物的细胞数，并计算出总培养体系中的细胞总数;
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收集细胞
室温下800g离心5min收集细胞沉淀。
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漂洗
用和培养基等体积的室温PBS充分重悬细胞，室温下800g离心5min收集细胞沉淀;
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漂洗
重复(3)一次。
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提取
按每5×106—2×107个细胞加入1 ml I-PER®试剂的比例到细胞沉淀中;
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涡旋
通过移液器上下吹打充分重悬细胞，以中等速度涡旋细胞溶液5s;
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孵育
冰上孵育10min;
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离心
4°C下15,000g离心15min;
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取上清
小心地将含有可溶性蛋白的上清液转移到新试管中，不要吸到沉淀，样品制备完成，制备好的样品可以分装保存于-80°C中。下层不溶蛋白和细胞碎片的沉淀可以保存下来以备后续分析需要。
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注意事项：
(1) 1 ml I-PER®试剂可以从5×106—2×107个细胞中获得约0.4-1.5 mg/ml可溶性蛋白。可以根据细胞量适当调整I-PER®试剂的用量;
(2) 所有的裂解步骤需要在4°C或冰上进行，以最大程度的减少蛋白的降解;
(3) 蛋白酶抑制剂和PBS等试剂需要自行准备;
(4) I-PER®昆虫细胞蛋白提取试剂在使用之前需要按比例加适量的蛋白酶抑制剂。