加入足量的样品和分子量大小标记物。SDS-PAGE根据蛋白电泳迁移率将其分离，迁移率是蛋白大小和电荷的函数。我们建议在预制Tris-Glycine小孔胶上样20-50μg总蛋白。

对于大分子量靶标，我们建议采用Tris-Acetate凝胶和相关缓冲液。应在待测样本附近的泳道始终加入分子量标记物，作为参考点。分子量标记物(或梯状条带)是已知分子量的纯化蛋白的混合物。采用预染色标记可以看见电泳过程中蛋白迁移的距离，随后确认经电转移至膜。采用生物素标记物可以看见膜上的梯状条带和抗体靶标。将两种类型的标记物都加入非常有用，既可以监测实验进展，也易于解释结果。

 

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1)  20-50 ug总蛋白或100 ng纯蛋白;

2)  尽量保持每个泳道的蛋白量一样，体积尽量一致;

3)  空置的泳道用等体积的1×loading buffer补齐;