实验Tips
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根据检测方式的不同，需要配制合适的封闭液或选择商品化的封闭液
检测方式 建议 化学发光法 含5% 脱脂奶粉的TBST的封闭液 荧光法 含5% 脱脂奶粉的TBS的封闭液（因为吐温有自发荧光，可能造成背景高） -
封闭的注意要点
1) 如果未验证出最佳封闭液浓度，首先选择厂家推荐的浓度;
2) 如果使用生物素或刀豆素结合的抗体，不能使用脱脂牛奶，因为牛奶同时含有糖蛋白和生物素，导致降低信号强度;
3) 天然蛋白由于含有磷酸酶，它使蛋白质在特定的氨基酸残基上去磷酸化，不适用于封闭磷酸化蛋白。磷酸化实验中，封闭液中应加入磷酸酶抑制剂。此外，推荐使用TBS作为缓冲液来稀释封闭液。在磷酸化蛋白质的检测中，不应使用脱脂牛奶作为封闭液，因为牛奶含有酪蛋白(磷酸表位)，其可以干扰抗磷酸酪氨酸抗体并导致背景信号增加;