凝胶的制备—电泳—WB解决方案

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2.2.2 凝胶的制备

| 2.2.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:Native-PAGE

凝胶由分离胶和浓缩胶组成:上层为浓缩胶，凝胶孔径较大，没有分子筛效应，其pH为6.8，由于快慢离子所形成的高电压梯度，使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层，大大提高了分辨率。下层为分离胶，凝胶孔径较小，有分子筛效应，pH为8.8，变性蛋白质分子所带负电荷基本一致，泳动速度主要决定于分子量。制备顺序为先灌制分离胶，然后在分离胶上灌制浓缩胶。

不同浓度胶的配方如下

6%GEL

溶液成分	不同体积凝胶中各成分所需体积(ml)
6%GEL	5ml	10ml	15ml	20ml
H₂O	2.6	5.3	7.9	10.6
30%Acr	1	2	3	4
1.5M Tris-HCl (PH8.8)	1.3	2.5	3.8	5
10%SDS	0.05	0.1	0.15	0.2
10%AP	0.05	0.1	0.15	0.2
TEMED	0.004	0.008	0.012	0.016

8%GEL

溶液成分	不同体积凝胶中各成分所需体积(ml)
8%GEL	5ml	10ml	15ml	20ml
H₂O	2.3	4.6	6.9	9.3
30%Acr	1.3	2.7	4	5.3
1.5M Tris-HCl (PH8.8)	1.3	2.5	3.8	5
10%SDS	0.05	0.1	0.15	0.2
10%AP	0.05	0.1	0.15	0.2
TEMED	0.003	0.006	0.009	0.012

10%GEL

溶液成分	不同体积凝胶中各成分所需体积(ml)
10%GEL	5ml	10ml	15ml	20ml
H₂O	1.9	4	5.9	7.9
30%Acr	1.7	3.3	5	6.7
1.5M Tris-HCl (PH8.8)	1.3	2.5	3.8	5
10%SDS	0.05	0.1	0.15	0.2
10%AP	0.05	0.1	0.15	0.2
TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008

12%GEL

溶液成分	不同体积凝胶中各成分所需体积(ml)
12%GEL	5ml	10ml	15ml	20ml
H₂O	1.6	3.3	4.9	6.6
30%Acr	2	4	6	8
1.5M Tris-HCl (PH8.8)	1.3	2.5	3.8	5
10%SDS	0.05	0.1	0.15	0.2
10%AP	0.05	0.1	0.15	0.2
TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008

15%GEL

溶液成分	不同体积凝胶中各成分所需体积(ml)
15%GEL	5ml	10ml	15ml	20ml
H₂O	1.1	2.3	3.4	4.6
30%Acr	2.5	5	7.5	10
1.5M Tris-HCl (PH8.8)	1.3	2.5	3.8	5
10%SDS	0.05	0.1	0.15	0.2
10%AP	0.05	0.1	0.15	0.2
TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008

浓缩胶的配方如下:

溶液成分	不同体积凝胶中各成分所需体积(ml)
浓缩胶	2ml	5ml	8ml	10ml
H₂O	1.4	3.4	5.5	6.8
30%Acr	0.33	0.83	1.3	1.7
1.0M Tris-HCl (PH6.8)	0.25	0.63	1	1.25
10%SDS	0.02	0.04	0.08	0.1
10%AP	0.02	0.04	0.08	0.1
TEMED	0.002	0.005	0.008	0.01

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