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1.2.2 BCA法

| 1.2.3 考马斯亮蓝法

准确度和灵敏度高,试剂稳定性好,兼容去垢剂,操作相对复杂

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    绘制标准曲线

    BSA 最好用与样本相同的溶液进行稀释,通常情况下,为了经济方便,可用蒸馏水稀释。稀释好的BAS配成不同浓度的标准品,建议设置5组以上浓度梯度的标准品,可参考以下浓度梯度进行设置:20,125,250,500,750,1000,1500ug/mLBSA,然后每孔加20ul,做两组重复,待测。建议每种浓度做2~3个复孔。

  • 2

    BCA工作液的准备

    将A液和B液按照50:1的比例混合后得到工作液。注意:当B液加入A液时,可看见浊度,轻轻晃动后消失,工作液为绿色;

  • 3

    样品检测

    96孔板中加入适当体积的样品,用蒸馏水将样品体积补至20ul。在各孔(标准曲线孔和样品孔)中分别加入180ul BCA工作液,37度 孵育30min;

  • 4

    在562nm处测其吸光度值,绘制标准曲线

    用酶标仪检测各点的吸光度值,并记录。根据标准品的数值做出标准曲线,然后计算出相应的样品浓度。

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