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1.2.3 考马斯亮蓝法

| 1.3 蛋白变性

灵敏度和重复性好,显色迅速,去垢剂兼容性弱

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    Bradford浓染液的配制

    100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后用蒸馏水补充至200ml,此染液放4°C至少6个月保持稳定;

  • 2

    标准曲线蛋白质样本的准备:

    尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线;

  • 3

    显色

    1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去;每个样本取适当的体积加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min;

  • 4

    计算浓度

    根据所测定的A595nm值,计算出未知样品的蛋白质浓度。

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