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1.1.4 动物血液蛋白

| 1.1.5  骨组织

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 1

    红细胞蛋白提取操作步骤

    (1)  血液取出后保存在抗凝管内,后在4°C条件下3000rpm离心5min;


    (2)  吸走上层血清,下层红细胞用冰的1XPBS3次;


    (3)  随后在冰浴下加入0.25XPBS和适量的蛋白酶抑制剂,溶解红细胞,溶解时间持续30min,裂解好之后样品即制备好了,分装保存于-20°C或者-80°C中备用;


    (4)  如果需要分开收集血红蛋白和红细胞膜蛋白,则可继续以下步骤。4°C条件下14000rpm离心5min,上清即为含有血红蛋白的样品,沉淀为红细胞膜成分,分开保存备用。

  • 2

    血液中免疫细胞蛋白提取操作步骤

    (1)  血液取出后保存在抗凝管内,加入适量红细胞裂解液,孵育5min,使红细胞充分裂解;


    (2)  50g离心5min,丢弃上清,沉淀即为免疫细胞沉淀;


    (3)  加适量的细胞裂解液,裂解液需要提前加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,冰上裂解10—20min;


    (4)  4°C 12000rpm离心5min,收集上清,分装保存于-20°C或者-80°C中备用。


    如需研究某种特定免疫细胞,可利用磁珠分选的方法先将特定细胞群分选出来,再进行研究。

  • 3

    血小板蛋白提取操作步骤

    (1)  用密度梯度离心法将血小板分离出来;


    (2)  加适量的血小板裂解液,裂解液需要提前加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,冰上裂解10—20min;


    (3)  4°C 12000rpm离心5min,收集上清,分装保存于-20°C或者-80°C中备用。

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