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WB成功指南
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WB成功指南
1. 样品制备
1.1 样品类型
1.1.1 常规哺乳动物贴壁细胞1.1.2 哺乳动物悬浮细胞1.1.3 哺乳动物软组织1.1.4 动物血液蛋白1.1.5 骨组织1.1.6 细菌1.1.7 酵母1.1.8 昆虫细胞1.1.9 植物组织1.1.10 膜蛋白1.1.11 细胞器/亚细胞器1.1.12 细胞核/质蛋白提取1.1.13 线粒体/胞浆组分提取1.1.14 内质网提取1.1.15 外泌体提取1.1.16 FFPE样本蛋白抽提1.2 蛋白定量
1.2.1 紫外吸光光度法1.2.2 BCA法1.2.3 考马斯亮蓝法1.3 蛋白变性
2. 上样与电泳
2.1 上样
2.1.1 上样2.1.2 蛋白标准品(maker)2.3 电泳
2.3.1 变性胶SDS-PAGE2.3.2 凝胶的制备2.3.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:Native-PAGE2.3.4 Tris-乙酸胶3. 转膜
3.1 转膜过程需要准备的产品
3.1.1 膜的选择3.2 步骤
3.2.1 转膜方法3.3 总蛋白染色
3.4 实验Tips
4. 封闭
4.1 封闭需准备的试剂
4.2 实验Tips
5. 抗体孵育/检测
5.1 抗体孵育过程中需要配制的各种试剂配方
5.2 步骤
5.2.1 抗体孵育5.2.2 检测5.2.3 同一张膜上继续孵育其他指标5.3 实验Tips
6. 疑难解答
6.1 无信号
6.2 高背景、多条带
6.3 条带大小不正确
6.4 其他
7. 常见WB指标实验Tips
7.1 Caspase 3:
7.2 LC3B:
7.3 NF-κB
7.4 P-AKT
7.5 NLRP3
7.6 E-Cadherin
7.7 p53