免疫细胞化学（ICC）与免疫荧光（IF）
1. 免疫组化（IHC）、免疫细胞化学（ICC）和免疫荧光（IF）概述
免疫组化（IHC） 和 免疫细胞化学（ICC） 是基于抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，从而确定组织或细胞内抗原的存在。这些技术在生物医学研究和临床诊断中具有重要应用。
免疫荧光（IF） 是一种用于检测和识别细胞和组织中蛋白质和其他分子的亚细胞分布和迁移的强大技术。IF 可以作为 IHC 或 ICC 中使用的传统显色标记的替代物，通过使用多种标记物的二级抗体，可以研究感兴趣蛋白的共定位，这是不能通过常规 IHC 或 ICC 实现的。
2. 免疫组化（IHC）与免疫细胞化学（ICC）
免疫组化（IHC） 利用通常冷冻或石蜡包埋的整个组织样本，而 免疫细胞化学（ICC） 指的是分离的或培养的细胞样本。这两种样本类型都可以使用 IF 进行标记检测。
IHC 的主要步骤包括：
-
样本制备：使用石蜡切片或冰冻切片。
-
固定：使用适当的固定剂（如福尔马林）固定组织。
-
抗原修复：通过热修复或酶修复使抗原表位重新暴露。
-
封闭：使用封闭液减少非特异性结合。
-
一抗孵育：使用特异性一抗与组织切片孵育。
-
二抗孵育：使用标记有酶或荧光素的二抗与一抗结合。
-
显色：加入显色底物，通过显微镜观察结果。
ICC 的主要步骤包括：
-
细胞固定：使用多聚甲醛或甲醇固定细胞。
-
通透处理：使用去垢剂（如 Triton X-100）使抗体能够进入细胞内部。
-
封闭：使用封闭液减少非特异性结合。
-
一抗孵育：使用特异性一抗与细胞孵育。
-
二抗孵育：使用标记有荧光素的二抗与一抗结合。
-
洗涤：使用 PBS 洗涤细胞，去除未结合的抗体。
-
观察：使用荧光显微镜观察结果。
3. 免疫荧光（IF）技术
免疫荧光（IF） 技术的主要特点是特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
IF 的主要步骤包括：
-
样本制备：使用组织或细胞样本。
-
固定：使用适当的固定剂（如多聚甲醛）固定样本。
-
通透处理：使用去垢剂（如 Triton X-100）使抗体能够进入细胞内部。
-
封闭：使用封闭液减少非特异性结合。
-
一抗孵育：使用特异性一抗与样本孵育。
-
二抗孵育：使用标记有荧光素的二抗与一抗结合。
-
洗涤：使用 PBS 洗涤样本，去除未结合的抗体。
-
观察：使用荧光显微镜观察结果。
4. ICC-IF 技术的应用
ICC-IF 技术在细胞和组织样本中具有广泛的应用，包括但不限于：
-
细胞内蛋白定位：通过 IF 技术可以精确定位细胞内特定蛋白的分布。
-
蛋白共定位研究：通过使用多种标记物的二级抗体，可以研究多个蛋白的共定位。
-
疾病研究：在病理学研究中，IF 技术可以用于识别和定位组织中的特定蛋白，帮助病理学家进行疾病诊断和分类。
5. 实验选择指南
在选择 IHC、ICC 和 IF 技术时，需要根据实验目的和样本类型进行选择：
-
IHC 适用于组织样本，特别是石蜡切片和冰冻切片。
-
ICC 适用于细胞样本，特别是培养的细胞。
-
IF 适用于需要高特异性和敏感性的实验，特别是需要进行蛋白共定位研究的实验。
6. 实验操作流程
IHC 实验操作流程：
-
样本制备：使用石蜡切片或冰冻切片。
-
固定：使用福尔马林固定组织。
-
抗原修复：通过热修复或酶修复使抗原表位重新暴露。
-
封闭：使用封闭液减少非特异性结合。
-
一抗孵育：使用特异性一抗与组织切片孵育。
-
二抗孵育：使用标记有酶或荧光素的二抗与一抗结合。
-
显色：加入显色底物，通过显微镜观察结果。
ICC 实验操作流程：
-
细胞固定：使用多聚甲醛或甲醇固定细胞。
-
通透处理：使用去垢剂（如 Triton X-100）使抗体能够进入细胞内部。
-
封闭：使用封闭液减少非特异性结合。
-
一抗孵育：使用特异性一抗与细胞孵育。
-
二抗孵育：使用标记有荧光素的二抗与一抗结合。
-
洗涤：使用 PBS 洗涤细胞，去除未结合的抗体。
-
观察：使用荧光显微镜观察结果。
IF 实验操作流程：
-
样本制备：使用组织或细胞样本。
-
固定：使用适当的固定剂（如多聚甲醛）固定样本。
-
通透处理：使用去垢剂（如 Triton X-100）使抗体能够进入细胞内部。
-
封闭：使用封闭液减少非特异性结合。
-
一抗孵育：使用特异性一抗与样本孵育。
-
二抗孵育：使用标记有荧光素的二抗与一抗结合。
-
洗涤：使用 PBS 洗涤样本，去除未结合的抗体。
-
观察：使用荧光显微镜观察结果。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| ICC Fixation Buffer | 550010 | 100mL |
| hEMT 3-Color ICC Kit (1 Kit) | SC026 | 1Kit |
| Permeabilization Buffer for ICC and IHC | SF40012-10ml | 10ml |
| ICC CONTROL S025 | 控制型加热循环器 | 0020004104 | EA |
