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质谱流式细胞技术(CyTOF):单细胞蛋白组学的精准导航

时间:2025-02-25 09:02:56
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质谱流式细胞技术(CyTOF)

技术原理与核心优势

质谱流式细胞技术(CyTOF)通过镧系金属同位素标记抗体,结合电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)实现单细胞多参数同步检测。相比传统流式细胞术,其核心突破在于:

  • 超高通量:单次实验可检测100万细胞,远超单细胞测序(1万细胞) 

  • 无荧光串色:金属标签分辨率达0.3%以下,无需补偿计算 

  • 高灵敏度:可检测单细胞中低至100拷贝的蛋白分子 

    CyTOF工作原理示意图

    CyTOF工作原理示意图

样本要求与制备规范

样本类型 细胞量要求 活率标准 运输规范
外周血 ≥4×10⁶ >70% 48小时内4℃运输 
组织样本 ≥1×10⁶ >70% 梯度冻存后干冰寄送 
细胞系 ≥4×10⁶ >90% 冻存液保存 

 

关键注意事项

  1. 避免使用含金属离子的试剂(如Ca²⁺、Mg²⁺的PBS)
  2. 组织样本需在4小时内完成单细胞悬液制备 
  3. 远距离运输需梯度冻存(程序降温至-80℃) 

技术性能对比

指标 CyTOF 传统流式 单细胞测序
检测维度 51+蛋白标记 20-30荧光通道 20000+基因
检测速度 500细胞/秒 10000细胞/秒 100细胞/秒
灵敏度 0.01%稀有细胞 0.1%稀有细胞 依赖mRNA丰度
成本(单细胞) 0.005美分 0.001美分 22美元
数据特征 蛋白表达定量 蛋白表达半定量 RNA转录组特征

临床与科研应用场景

肿瘤免疫微环境解析

    • 肝癌、肺癌等实体瘤中免疫细胞亚群动态监测 

    • 识别PD-1/CTLA-4抑制剂响应标志细胞

 

 

肿瘤免疫细胞亚群分析

肿瘤免疫细胞亚群分析

自身免疫疾病研究

    • 类风湿关节炎患者外周血Treg/Th17平衡分析
    • 系统性红斑狼疮B细胞异常活化轨迹追踪

神经科学突破

    • 脑组织中小胶质细胞功能状态分型 
    • 阿尔茨海默病中神经炎症细胞网络图谱

药物开发加速

    • CAR-T治疗前后T细胞耗竭标志物动态变化
    • 抗体药物靶点受体占位率精准量化

全流程解决方案

实验周期

  • 标准Panel检测(20例内):6-8周
  • 定制抗体开发:增加4-6周

数据分析

  • 基础分析:细胞亚群聚类(t-SNE/UMAP)、差异表达热图
  • 高级分析:细胞发育轨迹推断(SPADE)、信号网络建模
  • 可视化工具:Cytobank平台支持多维数据交互探索 

技术前沿突破

2022年浙江大学赵俊杰团队开发金属螯合卟啉框架标记技术,通过40 nm介孔纳米颗粒负载镧系元素,将检测灵敏度提升3倍,为肿瘤微环境稀有细胞鉴定提供新工具 。

新型金属标记技术示意图

新型金属标记技术示意图

未来发展方向

  1. 临床转化加速:CyTOF XT机型实现全自动检测,符合GMP规范 
  2. 多组学整合:与空间转录组联合解析细胞功能-位置关联
  3. 超高通量升级:新型进样系统将检测速度提升至1000细胞/秒 

 

名称 货号 规格
Acetyl-CoA Carboxylase (C83B10) Rabbit mAb 3676S 100ul
Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAb 11818T 20ul
Phospho-AMPKalpha (Thr172) (40H9) Rabbit mAb 2535L 300ul
FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb 2880S 100ul