质谱流式细胞技术(CyTOF)
技术原理与核心优势
质谱流式细胞技术(CyTOF)通过镧系金属同位素标记抗体,结合电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)实现单细胞多参数同步检测。相比传统流式细胞术,其核心突破在于:
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超高通量:单次实验可检测100万细胞,远超单细胞测序(1万细胞)
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无荧光串色:金属标签分辨率达0.3%以下,无需补偿计算
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高灵敏度:可检测单细胞中低至100拷贝的蛋白分子
CyTOF工作原理示意图
样本要求与制备规范
样本类型 | 细胞量要求 | 活率标准 | 运输规范 |
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外周血 | ≥4×10⁶ | >70% | 48小时内4℃运输 |
组织样本 | ≥1×10⁶ | >70% | 梯度冻存后干冰寄送 |
细胞系 | ≥4×10⁶ | >90% | 冻存液保存 |
关键注意事项:
- 避免使用含金属离子的试剂(如Ca²⁺、Mg²⁺的PBS)
- 组织样本需在4小时内完成单细胞悬液制备
- 远距离运输需梯度冻存(程序降温至-80℃)
技术性能对比
指标 | CyTOF | 传统流式 | 单细胞测序 |
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检测维度 | 51+蛋白标记 | 20-30荧光通道 | 20000+基因 |
检测速度 | 500细胞/秒 | 10000细胞/秒 | 100细胞/秒 |
灵敏度 | 0.01%稀有细胞 | 0.1%稀有细胞 | 依赖mRNA丰度 |
成本(单细胞) | 0.005美分 | 0.001美分 | 22美元 |
数据特征 | 蛋白表达定量 | 蛋白表达半定量 | RNA转录组特征 |
临床与科研应用场景
肿瘤免疫微环境解析
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肝癌、肺癌等实体瘤中免疫细胞亚群动态监测
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识别PD-1/CTLA-4抑制剂响应标志细胞
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肿瘤免疫细胞亚群分析
自身免疫疾病研究
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- 类风湿关节炎患者外周血Treg/Th17平衡分析
- 系统性红斑狼疮B细胞异常活化轨迹追踪
神经科学突破
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- 脑组织中小胶质细胞功能状态分型
- 阿尔茨海默病中神经炎症细胞网络图谱
药物开发加速
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- CAR-T治疗前后T细胞耗竭标志物动态变化
- 抗体药物靶点受体占位率精准量化
全流程解决方案
实验周期:
- 标准Panel检测(20例内):6-8周
- 定制抗体开发:增加4-6周
数据分析:
- 基础分析:细胞亚群聚类(t-SNE/UMAP)、差异表达热图
- 高级分析:细胞发育轨迹推断(SPADE)、信号网络建模
- 可视化工具:Cytobank平台支持多维数据交互探索
技术前沿突破
2022年浙江大学赵俊杰团队开发金属螯合卟啉框架标记技术,通过40 nm介孔纳米颗粒负载镧系元素,将检测灵敏度提升3倍,为肿瘤微环境稀有细胞鉴定提供新工具 。
新型金属标记技术示意图
未来发展方向
- 临床转化加速:CyTOF XT机型实现全自动检测,符合GMP规范
- 多组学整合:与空间转录组联合解析细胞功能-位置关联
- 超高通量升级:新型进样系统将检测速度提升至1000细胞/秒
名称 | 货号 | 规格 |
Acetyl-CoA Carboxylase (C83B10) Rabbit mAb | 3676S | 100ul |
Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) (D7D11) Rabbit mAb | 11818T | 20ul |
Phospho-AMPKalpha (Thr172) (40H9) Rabbit mAb | 2535L | 300ul |
FoxO1 (C29H4) Rabbit mAb | 2880S | 100ul |