慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺，COPD）是全球第三大死因。传统治疗以支气管扩张剂和激素为主，但患者仍面临急性加重频繁、肺功能进行性下降等困境。2025版慢性阻塞性肺疾病全球倡议：首次纳入两款靶向创新制剂——恩塞芬汀（Ensifentrine）和度普利尤单抗（Dupilumab）。这意味着COPD治疗正式迈入“精准靶向时代”。
一、慢阻肺治疗研究进展和布局
1、小分子抑制剂
磷酸二酯酶（PDEs）是一类通过调节环核苷酸水平影响多种细胞功能的酶。PDE3主要调控气道平滑肌中的环磷酸腺苷（cAMP）和环磷酸鸟苷（cGMP）浓度,PDE4 则通过调控 cAMP 水平，参与炎症细胞的激活。因此，抑制 PDE3 可导致气道平滑肌松弛（支气管扩张），而抑制PDE4则具有抗炎作用。PDE3/4抑制剂在抗炎和支气管扩张方面可产生协同或叠加效应。
①Verona Pharma：PDE3/4 双重抑制剂，2024 年6月，Ensifentrine（恩塞芬汀，商品名Ohtuvayre）获FDA批准上市，成为首个“抗炎+扩张”二合一吸入制剂 。默沙东以100亿美元收购Verona，锁定未来十年增长引擎 。
②恒瑞医药：将PDE3/4抑制剂HRS-9821全球权益（除中国外）以120亿美元总包授权给GSK，刷新中国创新药出海纪录 。国内药企如：正大天晴，海思科等也有该抑制剂布局。
2、生物制剂
①IL-4Rα单抗：赛诺菲，度普利尤单抗（Dupixent） 2024年9月获NMPA批准，用于血嗜酸粒细胞升高且控制不佳的COPD成人患者，III期试验急性加重率下降30–34% 。国内药企如：中国生物，三生国健等。
②IL-5单抗：GSK，美泊利珠单抗（Nucala）2025年2月在中国递交新适应症上市申请，针对嗜酸粒细胞表型COPD。
③TSLP单抗：阿斯利康，Tezepelumab，赛诺菲/博奥信，信达，智翔金泰等。
图：PDE3/4抑制剂作用原理
二、PDE3/4抑制剂相关检测
（一）第二信使cAMP检测
THUNDER cAMP检测试剂盒是一种均相时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）竞争性免疫分析，用于定量检测细胞在 GPCR 激动剂或拮抗剂处理后产生的cAMP。竞争结合Eu标记的cAMP示踪复合物（Eu-SA+生物素cAMP），远红标记cAMP抗体（FR-anti-cAMP），无游离cAMP时，示踪复合物与抗体结合，供体Eu受激发后产生FRET，665nm处产生最大信号，有游离cAMP时，样本cAMP与示踪复合物竞争抗体，665 nm信号随cAMP浓度升高而降低, 可计算665 nm / 615 nm 比值，与 cAMP 浓度呈反比关系.。
图：THUNDER cAMP检测原理及流程
图：THUNDER cAMP U266B1细胞标准品，激动剂检测数据
（二）下游信号通路检测（TR-FRET，WB）
1、THUNDER TR-FRET 磷酸化蛋白检测
以Phospho-NFκB为例
THUNDER TR-FRET采用经典的双抗夹心检测模型，特异性识别磷酸化位点来检测蛋白磷酸化水平，轻松实现4小时检测磷酸化蛋白和总蛋白，检测技术特异性好，灵敏度高，重复性好，操作简单。
图：THUNDER Phospho-NF-κB检测原理及流程
图：Phospho-NF-kB 和Total NF-kB相关数据
2、WB方法
以Phospho-NF-κB为例
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) 抗体采用1/1000稀释， HELA细胞100 ng/ml Calyculin A处理30分钟， TNF-α 20 ng/ml 处理5分钟，Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP 采用1/10000稀释，上样检测，数据展示如下。
图左：Hela细胞WB检测p-NFkB数据展示，图右：NIH3T3细胞WB检测p-NFkB数据展示
（三）细胞因子检测（Biomarker检测）
1、THUNDER TR-FRET方法（高通量，免洗，快速，上样量小）
以Human IL8为例
THUNDER TR-FRET应用双抗夹心技术检测模型，一对特性抗体识别细胞因子后与其结合，用光（320~340nm）激发荧光供体产生FRET（615nm）信号进而激发荧光受体发射信号（665nm）。抗体孵育1小时，信号强度与IL8浓度成正比。THUNDER TR-FRET Human IL8，Dynamic Range：15–10000pg/mL
图：THUNDER TR-FRET Human IL8检测原理及流程
图：THUNDER TR-FRET Human IL8检测数据
2、OneStep ELISA细胞因子检测
以Human TNFα为例
OneStep ELISA开发标签抗体捕获技术，板底包被标签抗体，可高灵敏捕获双抗夹心复合物，搭配高特异性重组单抗，一步即可在溶液中形成抗体-分析物夹心复合物。可轻松准确定量蛋白。仅需1h，即可定量细胞因子。Human TNFα Range：21.9–1404.6 pg/mL。
图：OneStep ELISA检测原理及HumanTNFα 标准曲线
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