TSLP（胸腺基质淋巴细胞生成素，thymic stromal lymphopoietin）是一种由上皮细胞产生的细胞因子，属于IL-2家族，遇到尘螨蛋白酶、病毒、细菌等刺激就会大量分泌。它必须先与 TSLP 受体（TSLPR）和IL-7受体α链组成“复合开关”，才能启动信号。信号一开，树突状细胞立刻被“极化”，指挥Th2细胞、ILC2、嗜碱粒细胞等全线出击，引发Ⅱ型炎症。因此，TSLP是皮肤、气道、肠道等屏障组织的“Ⅱ型免疫总司令”。
一、TSLP相关疾病
1、特异性皮炎（AD）: 搔抓所致机械性刺激可诱导角质形成细胞释放胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）。TSLP 通过与表皮朗格汉斯细胞（Langerhans cells, LCs）表面的 TSLP 受体（TSLPR）结合，驱动其分泌Ⅱ型细胞因子，包括IL-4、IL-5、IL-13及IL-31。同时，TSLP 亦可直接作用于皮肤Ⅱ型固有淋巴样细胞（ILC2s），促使其产生 IL-5 和 IL-13。这些Ⅱ型细胞因子在皮损局部积聚，诱发剧烈瘙痒，促使患者进一步搔抓，形成“炎症-搔抓-加重炎症”的正反馈环路。此外，TSLP可直接激活表达TRPA1离子通道的皮肤感觉神经末梢，从而介导特应性皮炎（AD）的瘙痒发生。
图：TSLP 特异性皮炎作用机制
From：Anti-TSLP antibodies: Targeting a master regulator of type 2 immune responses
2、哮喘（Asthma）：TSLP刺激树突状细胞（DCs）、CD4⁺T细胞、肥大细胞及嗜碱粒细胞，从而促进过敏原诱导的Th2细胞介导的气道免疫应答。此外，TSLP与IL-33协同激活第2型固有淋巴样细胞（ILC2s），增强 ILC2介导的免疫反应并诱发糖皮质激素抵抗。TSLP通过STAT5信号通路激活ILC2s中的抗凋亡分子Bcl-xL，从而诱导糖皮质激素抵抗；TSLP还可通过STAT5和MAPK通路在人ILC2s中诱导糖皮质激素抵抗。重度哮喘患者痰液中ILC2s数量显著增加，提示TSLP-ILC2通路参与了激素抵抗型重度哮喘的病理生理过程。
图：TSLP 哮喘作用机制
From：Anti-TSLP antibodies: Targeting a master regulator of type 2 immune responses
二、TSLP单抗研究进展
1、阿斯利康/安进（Tezepelumab）：全球首个TSLP单抗药用于治疗严重哮喘。
2、诺华（吸入Fab）：临床阶段用于治疗轻-重度哮喘。
3、正大天晴/博奥信（TSLP/IL-4R双抗）：临床阶段用于治疗哮喘、慢性鼻窦炎、特异性皮炎和慢阻肺。
4、康诺亚/石药：临床阶段用于治疗哮喘、慢性鼻窦炎和特异性皮炎。
5、和铂医药/科伦博泰：临床阶段用于治疗中-重度哮喘。
6、荃信生物：临床阶段用于治疗哮喘。
7、海正药业/外部合作：临床前-IND阶段用于治疗哮喘、肿瘤（B-ALL）。
三、TSLP单抗研究相关检测
（一）TSLP与TSLPR结合实验
1、TSLP和TSLPR蛋白（用于ELISA，TR-FRET，SPR等结合实验）
如下图所示：图左： TSLP (UA040102) 使用2.0μg/ml (100μl/well) 与TSLPR (UA010907) 做ELISA结合实验，检测结果EC50是0.83-1.33ng/ml。图右：TSLP (UA040102) 浓度2.0μg/ml(100μl/well)与TSLP抗体(Tezepelumab) 结合检测EC50在1.35-1.99 ng/ml。
图：TSLP/TSLPR结合数据和TSLP/ Tezepelumab结合数据
2、TR-FRET结合实验（快速1h检测）
用THUNDER TR-FRET技术检测蛋白-蛋白相互（PPI）作用时，荧光供体标记抗体识别TSLP，荧光受体标记抗体识别TSLPR，两个蛋白结合后，340nm光源激发供体产生能量共振转移（FRET），可在发射波长665nm检测到信号强度，当加入二者阻断剂时，信号下降，可检测出药物IC50。TR-FRET技术因其操作简单，快速1小时，免洗，小型化，在药物筛选工作中，常用此技术作为高通量筛选（HTS）的主要方法学。
图：THUNDER TR-FRET检测TSLP和TSLPR相互作用原理示意图
（二）信号通路检测（磷酸化蛋白）
1、THUNDER TR-FRET磷酸化检测试剂盒
以Phospho-STAT5为例
THUNDER TR-FRET采用经典的双抗夹心检测模型检测STAT5水平，两个标记了荧光Eu和FR的抗体分别识别STAT6磷酸化表位和稳定区表位，抗体结合拉进荧光基团，320nm激发后进而产生FRET（荧光共振能量转移），从而在665nm检测荧光信号值。
THUNDER检测技术特异性好，灵敏度高，重复性好，通量高，操作简单，手动15min即可完成实验。
图：THUNDER TR-FRET磷酸化STAT5检测原理及操作流程
图：THUNDER TR-FRET磷酸化STAT5在A431细胞验证数据
2、WB和流式抗体
Phospho-Stat5 (Tyr694) Recombinant Rabbit为例
图左：WB result of Phospho-Stat5 (Tyr694) Recombinant Rabbit mAb.Primary antibody: Phospho-Stat5 (Tyr694) Recombinant Rabbit mAb at 1/1000 dilution.Lane 1: untreated,A431 whole cell lysate 20 µg. Lane 2: A431 treated with 100 ng/ml EGF for 5 minutes whole cell lysate 20 µg.Secondary antibody: Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP conjugated at 1/10000 dilution.Predicted MW: 91 kDa.Observed MW: 90 kDa.
图右：Flow cytometric analysis of 4% PFA fixed 90% methanol permeabilized human peripheral blood T lymphocytes, treated with CD3, CD28 beads (Right panel) or untreated (Left panel), labeling Phospho-Stat5 (Tyr694) antibody at 1/200 dilution (0.25 μg)/ (Red) compared with a Rabbit monoclonal IgG (Black) isotype control and an unlabelled control (cells without incubation with primary antibody and secondary antibody) (Blue). Goat Anti - Rabbit IgG Alexa Fluor® 488 was used as the secondary antibody.
（三）细胞因子检测（Biomarker检测）
1、THUNDER TR-FRET细胞因子检测
Human CCL17/TARC为例——专利用品
THUNDER细胞因子检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的CCL17抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与细胞上清中CCL17结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与CCL17浓度成正比。全程仅需1h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽。
Human CCL17/TARC检测范围：2.4-30000pg/ml
图：Human CCL17/TARC 检测原理，流程及标曲
Human IL4 检测范围：6.4–30000 pg/ml
图：Human IL4检测原理，流程及标曲
2、OneStep ELISA细胞因子检测
OneStep ELISA开发标签抗体捕获技术，板底包被标签抗体，可高灵敏捕获双抗夹心复合物，搭配高特异性重组单抗，一步即可在溶液中形成抗体-分析物夹心复合物。可轻松准确定量蛋白。仅需1h，即可定量细胞因子。
Human IL-5为例，Range：3.9pg/ml-250pg/ml。
图：OneStep ELISA检测原理及Human IL5标曲数据
（四）过敏原IgE检测
Human IgE OneStep ELISA Kit
图左：Standard curve：Range 0.156 ng/mL–10 ng/mL。
图右：To assess the linearity of the assay, three samples were spiked with high concentrations of Human IgE in various matrices and diluted with the appropriate Calibrator Diluent to produce samples with values within the dynamic range of the assay.
相关产品链接
| 蛋白（药物靶点或细胞培养用） | ||
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| TSLP Human | UA040102 | 10ug |
| TSLPR Fc Tag | UA010907 | 100ug |
| IL-7 Human | UA040234 | 10ug |
| IL-7R alpha/CD127 His Tag Human | UA010567 | 100ug |
| IL-33 Human | UA040036 | 10ug |
| TR-FRET检测抗体（结合binding实验用） | ||
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Eu-anti-6xHis | EUHIS-1000 | 1000 pionts |
| FR-streptavidin | FRSA-1000 | 1000 pionts |
| 其他抗体：anti-FLAG，anti-GST，anti-Fc，anti-mFc，anti-RFc标签均可提供 | ||
| 磷酸化蛋白检测试剂盒及抗体 | ||
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Phospho-STAT5 (Y694/Y699) | KIT-STAT5P-500 | 500 pionts |
| Total STAT5 | KIT-STAT5T-500 | 500 pionts |
| Phospho-STAT6 (Y641) | KIT-HP-STAT6P-500 | 500 pionts |
| Total STAT6 | KIT-HP-STAT6T-500 | 500 pionts |
| Phospho-Stat6 (Tyr641) Recombinant Rabbit mAb | S0B6101 | 100ul |
| S-RMab®Stat6 Recombinant Rabbit mAb | S0B0085 | 100ul |
| STAT5 Recombinant Rabbit mAb | S0B0305 | 100ul |
| Phospho-Stat5 (Tyr694) Recombinant Rabbit mAb | S0B0851 | 100ul |
| 细胞因子检测（TR-FRET法） | ||
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Human CCL17/TARC | KIT-CCL17-500 | 500 pionts |
| Mouse CCL17/TARC | KIT-MCCL17-500 | 500 pionts |
| Human IL-4 | KIT-IL4-500 | 500 pionts |
| Human IL-6 | KIT-IL6-500 | 500 pionts |
| Mouse IL-6 | KIT-MIL6-500 | 500 pionts |
| 细胞因子检测（One Step ELISA法） | ||
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Human CCL17 | S0C3072 | 96T |
| Human IL-4 | S0C3047 | 96T |
| Human IL-5 | S0C3009 | 96T |
| Human IL-6 | S0C3004 | 96T |
| Human IL-13 | S0C3003 | 96T |
| IgE检测（One Step ELISA法） | ||
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Human IgE | S0C3042 | 96T |
| Mouse IgE | S0C3060 | 96T |
| Rat IgE | S0C3037 | 96T |
『优宁维药物研发』自创立以来，一直秉持初心提供全面、专业的技术与产品信息。为大/小分子药物研发，细胞基因治疗，疫苗等领域提供早期研发、小试、中试，生产等相关试剂、耗材、服务。
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